GERÄTE:
Eppendorfpipetten (10-100 µl, 100-1000 µl und 1-5 ml)
div. Meßkolben zum Ansetzen von Standards
div. Meßzylinder zum Ansetzen der Reagenzien
div. Flaschen zum Aufbewahren der Reagenzien
Photometer

REAGENZIEN:
Phenollösung: 8 g Phenol in 30 ml Ethanol und 60 ml Aqua bidest. lösen. 60 mg Nitroprussid-Natrium-Dihydrat in 10 ml Aqua bidest lösen und zu der Phenollösung geben. Gekühlt und fest verschlossen in Glasflasche aufbewahren. Mehrere Monate haltbar.

ACHTUNG: Phenol ist giftig und ätzend. Entsprechende Schutzkleidung tragen und Messabfälle als Sondermüll entsorgen! Nitroprussidnatrium ist auch giftig.

NaOH: 20 g NaOH in 1000 ml Aqua bidest lösen. In PE-Flasche aufbewahren.
Citratpuffer:  24 g Tri-Natrium-Citrat in 50 ml Aqua bidest lösen und mit 2 ml NaOH-Lsg. versetzen. In PE-Flasche bei Raumtemperatur aufbewahren. Mehrere Monate haltbar.
DTT-Reagenz: 50 mg Dichlorisocyanursäure in 20 ml NaOH-Lsg. (s.o.) lösen. Nicht haltbar. Unmittelbar vor der Benutzung ansetzen.
NH4-Standard (MERCK): 1 g Ammoniumchlorid pro Liter
Salzwasser 36 g/l NaCl in Aqua bidest.

STANDARDS
Stammlösung: NH₄+-Standard (MERCK) = 55,56 mmol/l
Arbeitsstandards: Aus der obigen Stammlösung verschiedene Arbeitsstandards durch Verdünnen mit Salzwasser herstellen (5-6 Eichpunkte).
Eichbereich: 16,67 - 83,55 µmol/l  (für Porenwasserproben) bzw. 1,667 - 16,67 µmol/l (für Proben aus der Wassersäule).

DURCHFÜHRUNG:
1000 µl Porenwasser oder Standard werden mit 4 ml Aqua bidest. und 200 µl Phenollösung versetzt . Nach 2 Min. werden 100 µl Citratpuffer und 200µl DTT-Reagenz hinzugefügt. Mischen und die Ansätze für ca. 10 Std. bei Raumtemperatur im Dunkeln aufbewahren. Absorption bei 630 nm messen.

Um die Bildung des Indophenol-Blau-Komplexes zu beschleunigen, können die Ansätze alternativ für 1-2 Stunden bei 30-40°C gehalten werden (ACHTUNG: Deckel können dabei abspringen!)

AUSWERTUNG:
Durch die Messung der Absorption der Arbeitsstandards eine Eichkurve erstellen und aufgrund der Absorption der Proben die Konzentrationen in den Proben bestimmen.

MÖGLICHE STÖRUNGEN:
Hohe Konzentrationen an H₂S (> 1mmol/l) im Probenmaterial behindern die Messungen. Daher sollten solche Proben vor der Messung mit 10 µl HCl (30%/suprapur) pro ml Probe angesäuert und für 1-2 Tage ohne Deckel in einem kühlen Raum aufbewahrt werden. (Verdünnungsfaktor bei der Auswertung berücksichtigen!)  Es besteht weiterhin die Möglichkeit das H₂S durch Argon auszutreiben. Bakterien können NH₄ rasch oxidieren. Proben nach der Probennahme so schnell wie möglich messen und Verunreinigungen vermeiden.

RELATIVE STANDARDABWEICHUNG: 4,8 % (lt. Grasshoff)
PRÄZISION:    5,5%
NACHWEISGRENZE:  0,05 µM
BESTIMMUNGSGRENZE:  0,15 µM