GERÄTE:
Eppendorfpipetten (10-100 µl, 100-1000 µl und 1-5 ml)
div. Meßkolben zum Ansetzen von Standards
div. Meßzylinder und Bechergläser zum Ansetzen der Reagenzien
div. Flaschen zur Aufbewahrung der Reagenzien
U-förmige Reduktionssäulen aus Glas (Innendurchm. ca. 8 mm, Länge eines Schenkels:ca.20 cm) gefüllt mit vorbereitetem Cadmium (s.u.)
Schlauchpumpe
Photometer

REAGENZIEN:
Sulfanilamid:  Löse 1,0 g Sulfanilamid in 10 ml konz. HCl und 60 ml Aqua bidest. Nach dem Abkühlen auf 100 ml auffüllen. In einer braunen Glasflasche aufbewahren. Für mehrere Wochen haltbar.
NED: 100 mg N-(1-naphtyl)-ethylendiamin-dihydrochlorid (NED) in 100 ml Aqua bidest lösen und gekühlt in einer Glasflasche aufbewahren. Haltbar bis Braunfärbung auftritt.
Ammoniumchloridpufferlösung: pH=8. Eine Lösung von 10 g NH₄Cl in 1000 ml Aqua bidest wird mit konz. NH₃ auf pH 8 eingestellt (man braucht ca. 600 µl).
Cadmiumgranulat: 0,5-0,8 mm
HCl: 2 N
CuSO₄-Lösung: 1%
NO₃-Standard: MERCK (1 g NO₃ pro Liter (=16,13 mmol/l)
Salzwasser: 36 g NaCl pro Liter

VORBEREITUNG DES REDUKTORS:
Cadmiumgranulat wird gesiebt und die 0,5-0,8 mm-Fraktion wird mit 2 N HCl gewaschen. Nach dem gründlichen Spülen (mit Aqua bidest) wird das Cadmium für 5-10 Min. in eine 1%ige CuSO₄-Lösung eingelegt. Anschließend wieder spülen. Mit einem kleinen Trichter die „bekupferten“ Cadmiumgranulate in die Reduktionssäule füllen, anschl. Reduktor mit Ammoniumchloridpuffer auffüllen (um Lufteinschlüsse zu vermeiden) und beide Öffnungen mit Stopfen aus Glaswolle verschliessen.
Zur Aktivierung des Reduktors ca. 20-30 ml Pufferlösung mit einem Gehalt von 100-200 µmol/l NaNO₃ durch die Reduktionssäule laufen lassen (Durchflußrate: 5ml/Min.). Dann nochmal gründlich mit Puffer spülen und die Messung kann beginnen.
Reduktorsäulen können auch auf Vorrat hergestellt und zur Lagerung mit Parafilm verschlossen werden.

STANDARDS
Stammlösung: NO₃-Standard (MERCK) = 16,13 mmol/l
Arbeitsstandards: Aus der obigen Stammlösung verschiedene Arbeitsstandards durch Verdünnen mit Salzwasser herstellen (5-6 Eichpunkte). Eichbereich: 8,065 - 80,65 µmol/l

DURCHFÜHRUNG:
1 ml Probe oder Standard mit 9 ml Puffer verdünnen und bei einer Fließgeschwindigkeit von 5 ml/Min. durch die Reduktionssäule schicken. Die letzten ankommenden 5ml abpipettieren und mit 100 µl Sulfanilamid und 100 µl NED versetzen. Nach 30 Min. die Absorption bei 540 nm messen.
Da die Methode sehr aufwendig ist, wird meist auf eine Doppelbestimmung verzichtet.

AUSWERTUNG:
Durch die Messung der Absorption der Arbeitsstandards eine Eichkurve erstellen und aufgrund der Absorption der Proben die Konzentrationen in den Proben bestimmen.

MÖGLICHE STÖRUNGEN:
Hohe Konzentrationen an H₂S (> 1mmol/l) im Probenmaterial behindern die Messungen. Daher sollten solche Proben vor der Messung mit 10 µl HCl (30%/suprapur) pro ml Probe angesäuert und für 1-2 Tage ohne Deckel in einem kühlen Raum aufbewahrt werden. (Verdünnungsfaktor bei der Auswertung berücksichtigen!)