GERÄTE:
Eppendorfpipetten
Vollpipetten (10,20,25 ml))
div. Meßkolben (50ml, 100 ml)
div. Meßzylinder (50ml; 100 ml)
Flaschen zur Aufbewahrung der Reagenzien
Eppendorfcaps (2ml), Parafilm, Bechergläser
Schlauch mit Sprudelstein
Photometer

REAGENZIEN:
Argon oder N2-Gas
O₂-freie NaCl-Lsg.: 36g NaCl in 1 l Aqua bidest. lösen.  Ca. 1 Std. mit Argon durchspülen. Unmittelbar vor Gebrauch entgasen !
Zinkacetat-Gelatine-Lsg.: 50 mg Gelatine werden in der Siedehitze in 25 ml O₂-freiem Wasser gelöst. Hierzu werden 261 mg ZnAc * 2H₂O gegeben. Einige Tage haltbar.
Farbreagenz: 400 mg N,N-Dimethyl-1,4-phenylendiamin-dihydrochlorid werden in 100 ml HCl (6N) gelöst. Im Kühlschrank, in dunkler Flasche aufbewahrt mehrere Monate haltbar.
Katalysator: 1,6 g FeCl₃ * 6 H₂O werden in 100 ml HCl (6N) gelöst. Unbegrenzt haltbar.

Titrisol-Standard 0,1N Na₂S₂O₃

356,7 mg KIO₃ (werden in 1000ml Aqua dest. gelöst. Unbegrenzt haltbar)

H₂SO₄ (9M): 50 ml konz. H₂SO₄ werden zu 50 ml Aqua dest. gegeben. (ACHTUNG: wird sehr heiß!)

1 g Stärke (in der Siedehitze in 100 ml Aqua dest. lösen und anschliessend auf 1000 ml auffüllen (wöchentlich erneuern)

KI (2g)

STANDARDS:
Sulfid-Standard (Stammlösung): 75 mg Na₂S * 9 H₂O werden in 100 ml O₂-freiem Salzwasser gelöst. (Konzentration: 3,125 mM S2-) Einige Tage haltbar.

Arbeitslösung:
Zu 25 ml Stammlsg. werden im 50 ml-Mischzylinder 25 ml ZnAcGelatine-Lsg.gegeben und ggf. mit Aqua bidest aufgefüllt. (Konzentration: 1561,3 µM S2-)
Kalibrierstandards: x ml Arbeitslsg. werden mit O₂-freiem Salzwasser auf 100 ml aufgefüllt. Einige Stunden haltbar. Eichbereich: 0-46,84 µM. (Obere Nachweisgrenze: 50 µM)

TITRATION

Zur Bestimmung der genauen S₂- Konz. der Kalibrierstandards (Zersetzung des Na₂S) muss eine Titration der Arbeitslösung durchgeführt werden.

Dazu werden vorgelegt:

25 ml sauerstofffreies Wasser

2 g KI

20 ml KIO₃-Standard

1 ml H₂SO₄ (9M)

Dann 10 ml Arbeitsstandard zugeben. Mit Parafilm verschlossen ca. 10 Min. stehen lassen. Dann mit der Na₂S₂O₃-Lösung (0,1N) titrieren. Bei nur noch schwach gelber  Färbung, 1 ml Stärkelösung zugeben (nach ca. 1,5 ml Titerzugabe). Endpunkt der Titration: Entfärbung des Iod-Stärke-Komplexes (nach ca. 1,7 ml).    

Außerdem muss eine Titration des Blindwertes (sauerstofffreies Wasser) durchgeführt werden (Verbrauch liegt bei ca. 1,9ml). Beide Titrationen sind 3 Mal durchzuführen.

Berechnung:

A - ml titriertes Volumen Na₂S₂O₃ – Lösung Blindwert

B - ml titriertes Volumen Na₂S₂O₃ – Lösung Arbeitsstandard

C – Konzentration Na₂S₂O₃ – Lösung

D - ml Vorlage Arbeitsstandard/Blindwert

T - Titer Na₂S₂O₃ – Lösung

Alle Ergebnisse sind mit dem Quotienten aus ermittelter Konzentration und theoretischer Konzentration der Arbeitslösung zu multiplizieren.

DURCHFÜHRUNG:
50 µl Zinkacetat-Gelatine-Lsg. werden im Eppendorfcap vorgelegt. Dann wird 1 ml Probe zugegeben. ZnS wird kolloidal in Lösung gehalten (kühl gelagert einige Tage haltbar). Zugabe von 10 µl Farbreagenz und 10 µl Katalysator. Nach 1 Std. bei 670 nm messen.

Um Verluste zu vermeiden muss die Probe sofort nach der Probennahme mit ZnAcGel.-Lsg. versetzt werden.

MÖGLICHE STÖRUNGEN:
- Um eine kolloidale Ausfällung bei stark H2S-haltigen Proben (>1mM) zu vermeiden, sollte immer zuerst das O₂-freiem Salzwasser vorgelegt werden und dann die Probe und die Zinkacetat-Gelatine-Lsg. zugegeben werden. Die Zugabe von Zinkacetat-Gelatine-Lsg. beträgt in diesem Fall 1ml. Entsprechend des größeren Reaktionsvolumens nach der Verdünnung wird zur Sulfidbestimmung mehr Reagenz verwendet (10µl Farbreagenz und 10 µl Katalysator pro ml eingesetzter Probenmenge).

Für die Konzentrationsberechnung muß berücksichtigt werden, daß die über die Eichgerade berechneten Werte noch mit dem Faktor f multipliziert werden müssen, um die Verdünnung zu berücksichtigen.

- Zuviel Reagenz bzw. zu niedrige Sulfidkonzentrationen (natürlich oder durch zu hohe Verdünnung) erkennt man häufig an Rosa-Färbung.